microRNA学习笔记(三)——microRNA的分子生物学研究方法

microRNA分子生物学试验方法是参照传统基因研究方法结合microRNA自身特点建立的,这类方法侧重于:

  • 发现新microRNA基因
  • microRNA表达检测
  • 阐释功能机制

发现新microRNA基因主要有三种方法:

  • 正向遗传学分析(线虫、果蝇)
  • 定向克隆(小鼠、人类)
  • 生物信息学软件分析(特殊细胞内低水平表达的microRNA基因)

microRNA表达分析方法(第五章详细介绍)

microRNA表达水平高低及其对下游靶基因的调控均对microRNA行使特定功能具有重要意义,microRNA表达失控会导致机体病理状态的出现。

对microRNA表达的研究主要有以下几种方法

  • 基因芯片
  • PAGE/Northern Blot
  • PCR方法

几种方法互为补充,描绘不同组织、不同发育阶段、生理或病理状态下的microRNA表达谱,提供microRNA的表达特征和表达失控情况等信息。

microRNA体外或体内水平的过表达研究(第六章详细介绍)

过表达:基因表达受到各种内外信号的精确调控,一旦这种调控机制的任何一个环节出现问题就会失控,有可能表现为表达过度,即该基因被过度的转录、翻译,最终基因表达产物超过正常水平。

研究基因功能的厨师步骤是提高该基因的表达水平,检测过表达所引起的细胞表型变化,初步阐释其可能的功能。

microRNA表达抑制研究(第七章详细介绍)

基因功能研究中使用多种过表达方法,但存在一定局限性,这需要辅以基因表达抑制的策略确认。

体外验证microRNA作用的靶基因(第八章详细介绍)

有很多分析microRNA靶基因的软件,综合使用可以降低分析误差,通过软件分析得到的靶基因结果需分子生物学实验加以验证。

microRNA的报告基因系统是microRNA靶基因研究中的一种常用辅助手段,常被用于检测单个microRNA的抑制情况及验证microRNA的靶基因。

报告基因:一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因,也就是说,是一个表达产物非常容易被鉴定的基因。

Zhao Li /
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